Plásmido Doble Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND: sc-404001-NIC

CHRND codifica la subunidad delta del receptor nicotínico de acetilcolina (nAChR) de tipo muscular, un canal catiónico pentamérico activado por ligando, concentrado en la membrana postsináptica de la unión neuromuscular. Tras la unión de la acetilcolina, el receptor se abre y permite el flujo de Na⁺ y K⁺, lo que impulsa la despolarización de la placa motora y acopla la transmisión sináptica con la contracción del músculo esquelético. La función de CHRND se integra con las vías que gobiernan el ensamblaje y la maduración de la sinapsis, incluida la señalización agrina–LRP4–MuSK, el agrupamiento de receptores y la estabilización mediada por rapsina (rapsyn) y andamiajes asociados. Las alteraciones genéticas de las subunidades del nAChR muscular, incluida CHRND, se asocian con trastornos de la transmisión neuromuscular como los síndromes miasténicos congénitos, lo que hace que este gen sea relevante para estudios mecanísticos de la excitabilidad sináptica y la biogénesis del receptor.

Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHRND en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHRND. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHRND. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHRND alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.