Plásmido CRISPR de Activación (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9: sc-402753-ACT

CHRNA9 codifica la subunidad alfa 9 del receptor nicotínico de acetilcolina, un componente de canal iónico regulado por ligando que forma receptores funcionales (a menudo junto con CHRNA10) para mediar la señalización colinérgica y el rápido flujo de cationes a través de la membrana plasmática. Mediante la apertura del canal dependiente de acetilcolina, CHRNA9 influye en la excitabilidad de la membrana, en las cascadas de señalización dependientes de calcio y en programas transcripcionales posteriores que moldean la comunicación celular. En contextos no neuronales, la señalización de receptores nicotínicos se ha relacionado con la regulación de la proliferación, la diferenciación y la señalización inflamatoria, lo que sitúa a CHRNA9 como un nodo útil para estudiar vías de canales iónicos acopladas a estímulos. Las alteraciones en la expresión o en la señalización de CHRNA9 se han asociado con fenotipos relevantes para la enfermedad descritos en biología sensorial y en comportamientos celulares relacionados con el cáncer, lo que respalda su estudio en modelos mecanísticos.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHRNA9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHRNA9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHRNA9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHRNA9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 9/CHRNA9 en células tumorales con expresión de CHRNA9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.