Particules Lentivirales d'Activation (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7: sc-416614-LAC

CHRNA7 code la sous-unité α7 du récepteur nicotinique de l’acétylcholine (nAChR), un canal ionique homopentamérique activé par un ligand, hautement perméable au Ca²⁺, qui relie la signalisation cholinergique à une dépolarisation rapide de la membrane et à des cascades de seconds messagers en aval. Dans les neurones et les cellules gliales, l’activité du nAChR α7 influence la plasticité synaptique, la libération de neurotransmetteurs et des voies dépendantes du Ca²⁺, notamment les voies MAPK/ERK et PI3K/AKT, tandis que dans des contextes immunitaires et épithéliaux, elle peut moduler la production de cytokines et l’excitabilité cellulaire. Une expression ou une fonction dérégulée de CHRNA7 a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, notamment des endophénotypes liés à la schizophrénie et à l’épilepsie, et a été étudiée dans la maladie d’Alzheimer ainsi qu’en biologie de l’inflammation. En tant que récepteur de surface intégrant la liaison d’un ligand à la signalisation intracellulaire, CHRNA7 est fréquemment étudié dans des modèles de différenciation neuronale, d’activité des réseaux et de dynamique calcique évoquée par des stimuli.

Les particules d'activation lentivirales Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CHRNA7 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CHRNA7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CHRNA7 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.