Plásmido CRISPR de Activación (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7: sc-416614-ACT

CHRNA7 codifica la subunidad α7 del receptor nicotínico de acetilcolina, un canal catiónico homopentamérico activado por ligando que media una rápida entrada de Ca²⁺ en respuesta a la señalización colinérgica. En neuronas y células inmunitarias, la actividad del nAChR α7 influye en la excitabilidad de la membrana y en cascadas de señalización dependientes de calcio que modelan la plasticidad sináptica, la liberación de neurotransmisores y programas de transcripción vinculados a la vía colinérgica antiinflamatoria. La señalización de calcio regulada por CHRNA7 se integra con procesos asociados a MAPK/ERK, JAK/STAT y NF-κB, afectando la producción de citocinas y las respuestas celulares al estrés. Variantes genéticas y alteraciones en la expresión de CHRNA7 se han asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, y la señalización colinérgica desregulada también se estudia en contextos de inflamación y neurodegeneración.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHRNA7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHRNA7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHRNA7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHRNA7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 en células tumorales con expresión de CHRNA7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.