Plásmido Doble Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5: sc-401702-NIC

CHRNA5 codifica la subunidad accesoria α5 de los receptores nicotínicos neuronales de acetilcolina (nAChR), que se ensambla con otras subunidades α y β para modular la compuerta del canal catiónico activado por ligando, la permeabilidad al Ca²⁺ y la desensibilización del receptor. A través de la señalización colinérgica, los nAChR que contienen α5 influyen en la excitabilidad de la membrana y en la liberación de neurotransmisores, conectándose con vías descendentes dependientes de calcio y programas de plasticidad sináptica. La variación genética y la expresión alterada de CHRNA5 se han asociado con la dependencia a la nicotina y fenotipos relacionados con el tabaquismo, y también se han estudiado en el contexto de rasgos neuropsiquiátricos y de la biología del epitelio de las vías respiratorias relevante para la exposición al humo del tabaco. Como subunidad moduladora, CHRNA5 ofrece una vía manejable para analizar cómo la composición del receptor ajusta la función de los circuitos colinérgicos y las respuestas transcripcionales dependientes del estímulo.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHRNA5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHRNA5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHRNA5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHRNA5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.