Plásmido Doble Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4: sc-401605-NIC

CHRNA4 codifica la subunidad α4 de los receptores nicotínicos neuronales de acetilcolina (nAChR), que se ensamblan como canales catiónicos pentaméricos activados por ligando, comúnmente junto con subunidades β2 para formar receptores α4β2 de alta afinidad. Tras la unión de acetilcolina o nicotina, estos receptores median la entrada de Na⁺ y Ca²⁺ para regular la excitabilidad de la membrana, la transmisión sináptica y la plasticidad dependiente de la actividad en los circuitos colinérgicos. La señalización dependiente de CHRNA4 converge con vías dependientes de calcio y programas de liberación de neurotransmisores que moldean la función de redes neuronales relacionada con la atención, la activación (arousal) y la recompensa. Alteraciones genéticas y funcionales en CHRNA4 se han asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y neurológicos, lo que lo convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de la señalización colinérgica y la biología de los receptores.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHRNA4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHRNA4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHRNA4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHRNA4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.