Plásmido CRISPR de Activación (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4: sc-401605-ACT

CHRNA4 codifica la subunidad α4 de los receptores nicotínicos neuronales de acetilcolina (nAChR), que se ensamblan como canales catiónicos regulados por ligando y median la transmisión sináptica rápida en el sistema nervioso central. Los receptores que contienen α4, con frecuencia formando complejos α4β2, regulan la despolarización de la membrana y la señalización dependiente de calcio que influyen en la liberación de neurotransmisores, la excitabilidad neuronal y la plasticidad sináptica. A través de la señalización colinérgica, CHRNA4 contribuye a vías que gobiernan la atención, el estado de alerta, el aprendizaje y los circuitos relacionados con la recompensa, y la función alterada del receptor se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, incluida la susceptibilidad a la epilepsia y la dependencia de la nicotina. Por lo tanto, modular la expresión de CHRNA4 es relevante para estudiar la estequiometría del receptor, la biofísica del canal y los programas transcripcionales dependientes de la actividad en modelos neuronales humanos.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHRNA4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHRNA4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHRNA4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHRNA4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 en células tumorales con expresión de CHRNA4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.