Plásmido Doble Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3: sc-401582-NIC

CHRNA3 codifica la subunidad alfa 3 del receptor nicotínico de acetilcolina, un componente central de los canales catiónicos activados por ligando que median la neurotransmisión colinérgica rápida. Tras la unión de acetilcolina o nicotina, los receptores que contienen CHRNA3 regulan la despolarización de la membrana y la entrada de Ca²⁺, acoplándose a señales intracelulares que influyen en la excitabilidad, la transmisión sináptica y la secreción neuroendocrina. En tejidos humanos, CHRNA3 destaca en los ganglios autónomos y contribuye a vías que controlan la función cardiovascular, gastrointestinal y respiratoria. Las variaciones genéticas y la expresión desregulada en el locus CHRNA3 se han asociado con la dependencia de la nicotina y la susceptibilidad a enfermedades relacionadas con el tabaquismo, lo que respalda su utilidad en estudios mecanísticos de la señalización colinérgica y la biología de la adicción.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHRNA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHRNA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHRNA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHRNA3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.