Plásmido Doble Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2: sc-403376-NIC

CHRNA2 codifica la subunidad α2 de los receptores nicotínicos neuronales de acetilcolina (nAChR), canales catiónicos activados por ligando que se ensamblan como heteropentámeros para mediar la neurotransmisión colinérgica rápida. Tras la unión de acetilcolina o de un agonista nicotínico, los nAChR que contienen α2 incrementan la entrada de Na⁺ y Ca²⁺, modulando la excitabilidad de la membrana y la señalización dependiente de la actividad, que converge con programas de transcripción regulados por Ca²⁺ y con la plasticidad sináptica. La expresión de CHRNA2 contribuye a la modulación de circuitos a nivel del sistema nervioso central, e influye en procesos como la vigilia, la atención y la señalización relacionada con la recompensa. La variación genética y la disfunción de los nAChR se han asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y rasgos vinculados al consumo de sustancias, lo que convierte a CHRNA2 en una diana útil para estudios mecanísticos de alteraciones en las vías colinérgicas.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHRNA2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHRNA2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHRNA2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHRNA2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.