Plásmido Doble Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1: sc-401880-NIC

CHRNA1 codifica la subunidad α1 del receptor nicotínico de acetilcolina de tipo muscular, un canal catiónico regulado por ligando esencial para la transmisión sináptica rápida en la unión neuromuscular. Tras la unión de la acetilcolina, la apertura del receptor impulsa la entrada de Na⁺ y la despolarización de la membrana, que se acopla a los procesos de excitación–contracción mediante la activación posterior de canales regulados por voltaje y la señalización de Ca²⁺. La función de CHRNA1 se integra con las vías de agrupamiento y estabilización de receptores postsinápticos, que implican la señalización agrina–LRP4–MuSK y el ensamblaje dependiente de rapsina. Las alteraciones genéticas o funcionales de este complejo receptor están implicadas en los síndromes miasténicos congénitos y en defectos relacionados de la transmisión neuromuscular, lo que convierte a CHRNA1 en una diana clave para estudios mecanísticos de la fisiología sináptica y la biogénesis del receptor.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHRNA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHRNA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHRNA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHRNA1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.