Plasmide CRISPR/Cas9 KO NHERF-1 (m): sc-424152

Présentation

Slc9a3r1 code pour NHERF-1 (Na⁺/H⁺ exchanger regulatory factor 1), une protéine d’échafaudage contenant des domaines PDZ, qui organise des récepteurs membranaires, des transporteurs ioniques et des protéines de signalisation au niveau du cortex apical. NHERF-1 associe des complexes tels que NHE3 à des adaptateurs du cytosquelette (p. ex. l’ezrine) afin de coordonner le transport ionique épithélial, la polarité et la structure des microvillosités, et elle module la dynamique de signalisation des GPCR et des récepteurs à activité tyrosine kinase. Par ces interactions, elle influence des processus tels que l’endocytose, le trafic intracellulaire et des voies de signalisation dépendantes des phosphoinositides qui façonnent l’homéostasie cellulaire. La dérégulation de l’échafaudage dépendant de NHERF-1 a été associée à des dysfonctionnements épithéliaux et à des états de signalisation aberrants pertinents pour l’étude de l’inflammation, de l’intégrité de la barrière et du remodelage des voies oncogéniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NHERF-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc9a3r1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc9a3r1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc9a3r1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NHERF-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc9a3r1 pour l'étude de la signalisation de NHERF-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Slc9a3r1 essentiels à la fonction de NHERF-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc9a3r1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NHERF-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NHERF-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc9a3r1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NHERF-1 plasmide HDR (m) et le NHERF-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc9a3r1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc9a3r1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.