Plasmide Double Nickase (m) NGAL: sc-421398-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) NGAL correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NGAL Double Nickase (m) et le plasmide NGAL Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Lcn2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NGAL Antibody (H-7): sc-515876
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) NGAL | sc-421398-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Lcn2** code la lipocaline associée à la gélatinase des neutrophiles (**NGAL**), une lipocaline sécrétée qui se lie au fer associé aux sidérophores et module l’homéostasie du fer au cours des réponses immunitaires innées. NGAL est induite par des stimuli inflammatoires et participe aux programmes de stress épithélial via des voies liées à **NF-κB**, aux **MAPK** et à la signalisation par les cytokines, influençant le recrutement des neutrophiles, la défense de barrière et l’activité antimicrobienne. Dans des modèles murins, les variations d’expression de NGAL sont fréquemment utilisées comme indicateur de lésion tissulaire et de remodelage inflammatoire, notamment dans les atteintes rénales, l’inflammation hépatique, les dysfonctionnements métaboliques et les modifications du microenvironnement associé aux tumeurs. Ses rôles dans la séquestration du fer et la régulation immunitaire font de **Lcn2** un point d’entrée utile pour étudier les interactions hôte–pathogène, le stress oxydatif et le dialogue stroma–immunité.
NGAL Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Lcn2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Lcn2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Lcn2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Lcn2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.