Plasmide Double Nickase (h) NFRκB: sc-407203-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NFRκB correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NFRκB Double Nickase (h) et le plasmide NFRκB Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NFRKB. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NFRκB Antibody (A-12): sc-514977
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NFRκB | sc-407203-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) NFRκB | sc-407203-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFRKB (protéine de liaison à l’ADN apparentée au facteur de liaison à kappa-B nucléaire) code un facteur se liant à l’ADN, initialement identifié grâce à ses interactions avec des éléments régulateurs de NF-κB, et est impliqué dans des programmes de contrôle transcriptionnel liés à l’organisation de la chromatine. La protéine a été décrite comme un composant associé à des complexes de remodelage de la chromatine dépendants de l’ATP, étayant des rôles dans la régulation de l’expression génique, le maintien du génome et des processus nucléaires couplés au cycle cellulaire. Via ses liens avec des circuits transcriptionnels proches de NF-κB, NFRKB est étudié dans des contextes où la signalisation inflammatoire croise le remodelage nucléaire et les réponses au stress. Une régulation anormale de la chromatine et des sorties transcriptionnelles liées à NF-κB sont fréquemment examinées en biologie du cancer et dans des modèles de maladies associées au système immunitaire, faisant de NFRKB un nœud utile pour des études mécanistiques de la transcription et de la régulation nucléaire.
NFRκB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NFRKB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NFRKB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NFRKB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NFRKB.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.