NFKBIA/IkB alpha Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421878

Descripción general

Nfkbia codifica el inhibidor alfa de NF-κB (IκBα), un regulador negativo clave de la señalización canónica de NF-κB que se une a los complejos RelA/p50 y los retiene en el citoplasma en condiciones basales. Tras la estimulación por citocinas proinflamatorias, ligandos de receptores tipo Toll o señalización del receptor de antígeno, IκBα es fosforilado por el complejo IKK y degradado, lo que permite la translocación nuclear de NF-κB y la transcripción de genes implicados en la inmunidad, la respuesta al estrés y la supervivencia celular. Este circuito de retroalimentación modula la activación de la inmunidad innata y adaptativa, la producción de citocinas y las decisiones sobre el destino celular, y se utiliza ampliamente como punto de entrada mecanístico para estudiar la remodelación tisular impulsada por la inflamación y la señalización oncogénica. En sistemas murinos, la perturbación de NFKBIA se emplea con frecuencia para diseccionar la interconexión de vías con MAPK, interferón y programas apoptóticos en modelos de disregulación inmunitaria y de señalización del microambiente tumoral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NFKBIA/IkB alpha (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nfkbia en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nfkbia junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nfkbia tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NFKBIA/IkB alpha.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nfkbia para la investigación de la señalización de NFKBIA/IkB alpha, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Nfkbia críticos para la función de NFKBIA/IkB alpha
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nfkbia para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NFKBIA/IkB alpha CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido NFKBIA/IkB alpha CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nfkbia. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NFKBIA/IkB alpha (m) y el plásmido HDR NFKBIA/IkB alpha (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nfkbia para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nfkbia definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.