Plásmido CRISPR de Activación (h) NFKBIA/IkB alpha: sc-400034-ACT

NFKBIA codifica IκBα, un inhibidor citoplasmático principal de NF-κB que se une a complejos RELA/p50 y restringe su translocación al núcleo en condiciones basales. Tras la estimulación por citocinas, ligandos de receptores tipo Toll o señales de estrés, IκBα es fosforilada por el complejo IKK, ubiquitinada y degradada, lo que permite una rápida transcripción dependiente de NF-κB de programas inflamatorios, inmunitarios y de supervivencia. NFKBIA también participa en el control por retroalimentación negativa porque es, a su vez, un gen diana de NF-κB, ayudando a restablecer la actividad de la vía tras la señalización. La expresión desregulada de NFKBIA o un recambio alterado de IκBα se han relacionado con inflamación crónica, desregulación inmunitaria y biología tumoral impulsada por NF-κB, lo que lo convierte en un nodo frecuente en estudios de señalización innata y decisiones de destino celular.

NFKBIA/IkB alpha El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NFKBIA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NFKBIA/IkB alpha El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NFKBIA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NFKBIA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NFKBIA/IkB alpha. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NFKBIA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NFKBIA/IkB alpha en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NFKBIA/IkB alpha en células tumorales con expresión de NFKBIA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.