Plasmide CRISPR d'Activation (h) Neuroplastin: sc-404244-ACT

Le gène humain **NPTN** code la **neuroplastine**, une glycoprotéine d’adhésion cellulaire de la superfamille des immunoglobulines, enrichie au niveau des synapses neuronales et également exprimée dans divers tissus non neuronaux. La neuroplastine participe à la formation et à la stabilisation des synapses, régule la neurotransmission excitatrice et la plasticité synaptique, et intervient dans l’homéostasie du Ca²⁺ via un couplage fonctionnel aux ATPases Ca²⁺ de la membrane plasmique, influençant en aval la signalisation calciodépendante. Ces activités relient **NPTN** à des voies contrôlant la croissance des neurites, le remodelage des circuits dépendant de l’activité et l’organisation des protéines membranaires. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de la neuroplastine ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de dysfonctions synaptiques liées à la cognition et du remodelage de l’état cellulaire dans des modèles de maladie.

Neuroplastin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NPTN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Neuroplastin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NPTN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NPTN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Neuroplastin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NPTN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Neuroplastin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Neuroplastin dans les cellules tumorales présentant une expression de NPTN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.