Particules Lentivirales d'Activation (h) neuropilin-2: sc-400650-LAC

Le gène humain **NRP2** code la neuropiline-2, un co-récepteur transmembranaire multifonctionnel qui module les signaux de guidage et la signalisation des facteurs de croissance, notamment les sémaphorines de classe 3 et les ligands de la famille VEGF. Par ses interactions avec les plexines et les récepteurs du VEGF, la neuropiline-2 influence le guidage axonal, le développement lymphatique et vasculaire, la migration des cellules endothéliales et immunitaires, ainsi que la dynamique épithélio-mésenchymateuse. La signalisation dépendante de NRP2 affecte le remodelage du cytosquelette, l’adhésion médiée par les intégrines et des voies en aval telles que PI3K/AKT et MAPK, de manière dépendante du contexte. Une expression ou une activité altérée de la neuropiline-2 a été associée aux interactions tumeur–stroma, à l’angiogenèse/lymphangiogenèse, à l’inflammation et à des phénotypes métastatiques, ce qui justifie son étude dans des modèles de biologie du cancer et de la biologie vasculaire.

Les particules d'activation lentivirales neuropilin-2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NRP2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales neuropilin-2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NRP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de neuropilin-2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NRP2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.