Neuronatin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421919

概要

マウスNnatは、神経系および内分泌組織に豊富に発現する、小型のインプリンティング遺伝子産物であり、発生過程で制御されるタンパク質であるニューロナチン（neuronatin）をコードします。ニューロナチンは主として小胞体膜に局在し、細胞内カルシウム動態の制御、小胞体（ER）恒常性、ならびに代謝シグナルを細胞状態の決定へと結び付ける機構に関与すると考えられています。Ca2+依存性シグナル伝達やストレス応答性経路への影響を介して、ニューロナチンは神経分化、シナプス機能、脂肪細胞および膵β細胞の生物学、ならびにエネルギーバランスの調節と関連付けられてきました。NNAT発現の異常は、代謝機能障害、神経発達に関わる表現型、腫瘍関連の細胞プログラムといった状況で報告されており、Nnatは発生や細胞ストレス応答の機構研究に有用な解析ノードとなります。

Neuronatin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNnat遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nnat内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nnatのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Neuronatinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Neuronatinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nnat欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Neuronatinの機能に不可欠なNnatエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nnatゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Neuronatin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNeuronatin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nnat遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Neuronatin HDRプラスミド（m）および Neuronatin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNnatホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNnat標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。