Plasmide CRISPR/Cas9 KO Neuronatin (m): sc-421919

Présentation

Le gène murin **Nnat** code la **neuronatine**, une petite protéine soumise à empreinte génomique, dont l’expression est régulée au cours du développement et qui est enrichie dans le système nerveux et les tissus endocriniens. La neuronatine se localise principalement à la membrane du réticulum endoplasmique et contribuerait au contrôle de la dynamique du calcium intracellulaire, de l’homéostasie du RE et du couplage entre signaux métaboliques et décisions de destin cellulaire. Par ses effets sur la signalisation dépendante du Ca2+ et les voies sensibles au stress, la neuronatine a été associée à la différenciation neuronale, à la fonction synaptique, à la biologie des adipocytes et des cellules β pancréatiques, ainsi qu’à la régulation de l’équilibre énergétique. Une expression dérégulée de **NNAT** a été rapportée dans des contextes de dysfonctionnement métabolique, de phénotypes neurodéveloppementaux et de programmes cellulaires associés aux tumeurs, faisant de **Nnat** un point d’entrée pertinent pour des études mécanistiques du développement et des réponses cellulaires au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Neuronatin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nnat dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nnat, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nnat à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Neuronatin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nnat pour l'étude de la signalisation de Neuronatin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nnat essentiels à la fonction de Neuronatin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nnat pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Neuronatin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Neuronatin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nnat. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Neuronatin plasmide HDR (m) et le Neuronatin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nnat pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nnat définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.