neuroligin 2CRISPR激活质粒(h): sc-402250-ACT

人类 NLGN2 基因编码 neuroligin 2（神经连接蛋白 2），这是一种位于突触后膜的细胞黏附蛋白，富集于抑制性突触。在抑制性突触处，它通过与 neurexin 以及 gephyrin 等支架蛋白复合体偶联，协调突触的特异性确定、成熟与神经递质传递。借助这些相互作用，neuroligin 2 影响 GABA 能突触的组装、受体聚集以及兴奋–抑制平衡，从而塑造神经网络的同步性与可塑性。NLGN2 表达水平或突触定位的失调与抑制性回路功能改变相关，而这类改变被认为参与多种神经发育与精神神经表型，包括自闭症谱系障碍、精神分裂症以及焦虑相关行为。作为突触组织者，NLGN2 常被用于研究调控中间神经元连接、抑制性突触稳定性以及活动依赖性重塑的相关通路。

neuroligin 2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NLGN2的表达。

neuroligin 2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的NLGN2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于NLGN2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性neuroligin 2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的NLGN2位点，并能够研究内源性位点上依赖于neuroligin 2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NLGN2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟neuroligin 2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。