Plásmido CRISPR de Activación (h) neuroligin 1: sc-401668-ACT

El gen humano **NLGN1** codifica la neuroligina 1, una proteína de adhesión celular postsináptica que se une a las neurexinas presinápticas para organizar la formación, maduración y estabilidad de las sinapsis excitatorias. La neuroligina 1 actúa como andamiaje de complejos proteicos sinápticos y contribuye a la plasticidad sináptica dependiente de la actividad al coordinar la localización de receptores y la señalización downstream que moldea la conectividad neuronal. Por su papel en la sinaptogénesis y el refinamiento de circuitos, **NLGN1** se estudia con frecuencia en vías que regulan la transmisión glutamatérgica y la remodelación sináptica. La alteración de la señalización neuroligina–neurexina y la desregulación de **NLGN1** se han investigado en el contexto de mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neuropsiquiátricas, incluyendo fenotipos de disfunción sináptica.

neuroligin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NLGN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

neuroligin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NLGN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NLGN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de neuroligin 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NLGN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de neuroligin 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía neuroligin 1 en células tumorales con expresión de NLGN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.