Plásmido Doble Nickase (m) Neurofibromin 2/NF2/Merlin: sc-421862-NIC

El gen Nf2 del ratón codifica la neurofibromina 2 (Merlin), una proteína de andamiaje de membrana–citoesqueleto que integra señales provenientes de las uniones célula–célula para restringir la proliferación y mantener la arquitectura epitelial. Merlin coordina la inhibición por contacto y la mecanotransducción al vincular la actina cortical con vías reguladoras del crecimiento, incluida la señalización Hippo y los programas transcripcionales posteriores de YAP/TAZ. A través de estas interacciones, NF2 modula el tráfico de receptores y la dinámica del citoesqueleto, lo que influye en la migración, la polaridad y el control del ciclo celular. La desregulación de las redes asociadas a NF2 es de amplia relevancia para estudios de homeostasis tisular y mecanismos supresores tumorales en linajes del sistema nervioso y mesenquimales.

Neurofibromin 2/NF2/Merlin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Nf2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Nf2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Nf2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Nf2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.