neurexin I Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401872-ACT

O NRXN1 humano codifica a neurexina I, um recetor de adesão celular pré-sináptico que coordena a especificação e a maturação das sinapses ao interagir com parceiros pós-sinápticos como as neuroliginas e as LRRTMs. A neurexina I ajuda a organizar a maquinaria de libertação de neurotransmissores, influencia a exocitose dependente de cálcio e sustenta a plasticidade sináptica dependente da atividade, central para o equilíbrio entre circuitos excitatórios e inibitórios. A função do NRXN1 está ligada a vias que regulam a conectividade neuronal, a orientação axonal e redes de sinalização sináptica que moldam o desenvolvimento cortical. Alterações genéticas e regulatórias do NRXN1 têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, tornando-o um alvo-chave para estudos mecanísticos de disfunção sináptica.

neurexin I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NRXN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

neurexin I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NRXN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NRXN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de neurexin I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NRXN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de neurexin I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via neurexin I em células tumorais com expressão de NRXN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.