Neurabin-II Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403741-ACT

PPP1R9B codifica a neurabina-II, uma proteína adaptadora (scaffold) ligante de F-actina, enriquecida no cérebro, que direciona a proteína fosfatase 1 (PP1) para complexos de sinalização citosqueléticos e sinápticos. Por meio de interações que organizam a dinâmica da actina e a fosforregulação, a neurabina-II contribui para a remodelação de espinhas dendríticas, o crescimento de neuritos e a modulação da excitabilidade neuronal e da sinalização de receptores. Essas funções ligam o PPP1R9B a vias que governam a plasticidade sináptica, a arquitetura do citoesqueleto e a transdução de sinais na densidade pós-sináptica. O direcionamento desregulado de PP1 e a organização sináptica dependente de actina são relevantes para áreas de pesquisa em neurobiologia que incluem fenótipos cognitivos e neuropsiquiátricos, nas quais conectividade e sinalização neuronais alteradas são temas mecanísticos comuns.

Neurabin-II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPP1R9B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Neurabin-II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPP1R9B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPP1R9B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Neurabin-II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPP1R9B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Neurabin-II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Neurabin-II em células tumorais com expressão de PPP1R9B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.