Plásmido CRISPR de Activación (h) Neurabin-II: sc-403741-ACT

PPP1R9B codifica neurabina-II, una proteína andamio de unión a la F-actina enriquecida en el cerebro que dirige a la proteína fosfatasa 1 (PP1) hacia complejos de señalización del citoesqueleto y sinápticos. Mediante interacciones que organizan la dinámica de la actina y la fosforregulación, la neurabina-II contribuye a la remodelación de las espinas dendríticas, al crecimiento de neuritas y a la modulación de la excitabilidad neuronal y de la señalización de receptores. Estas funciones vinculan a PPP1R9B con vías que controlan la plasticidad sináptica, la arquitectura del citoesqueleto y la transducción de señales en la densidad postsináptica. La desregulación del direccionamiento de PP1 y de la organización sináptica dependiente de actina es relevante para áreas de investigación en neurobiología que incluyen fenotipos cognitivos y neuropsiquiátricos, en los que la conectividad y la señalización neuronal alteradas son temas mecanísticos comunes.

Neurabin-II El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PPP1R9B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Neurabin-II El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PPP1R9B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PPP1R9B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Neurabin-II. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PPP1R9B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Neurabin-II en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Neurabin-II en células tumorales con expresión de PPP1R9B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.