Neu4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406284

Übersicht

NEU4 kodiert die humane Neuraminidase 4 (Neu4), eine Sialidase, die terminale Sialinsäuren von Glykoproteinen und Glykolipiden entfernt und dadurch den Umsatz von Glykokonjugaten sowie die Signalübertragung an der Zelloberfläche und in Organellen moduliert. Die Neu4-Aktivität beeinflusst den Sialylierungszustand von Lysosomen und Mitochondrien und kann über eine veränderte Glykanzusammensetzung Prozesse wie Membrantransport, Autophagie und metabolische Stressantworten beeinflussen. Durch die Umgestaltung sialylierungsabhängiger Interaktionen trägt NEU4 zur Regulation von Immunsignalen und Zellschicksalsentscheidungen in Kontexten bei, in denen Glykosylierungsmuster umgebaut werden. Eine Fehlregulation der Sialidase-Aktivität und aberrante Sialylierung wurden mit entzündlichen Phänotypen und krebsassoziierten Veränderungen der Zelladhäsion und Invasion in Verbindung gebracht, was NEU4 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien in der Glyko-Biologie macht.

Das Neu4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NEU4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NEU4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NEU4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Neu4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NEU4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Neu4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NEU4-Exone abzielen, die für die Neu4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NEU4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Neu4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Neu4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NEU4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Neu4 HDR-Plasmid (h) und Neu4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NEU4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NEU4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.