Plásmido Doble Nickase (h) Neu1: sc-401488-NIC

NEU1 codifica la neuraminidasa 1 (Neu1), una sialidasa lisosomal que elimina los ácidos siálicos terminales de glicoproteínas y glicolípidos, contribuyendo al recambio de los glicoconjugados y a la función del lisosoma. Neu1 actúa dentro de un complejo multienzimático junto con la proteína protectora/catepsina A y la β-galactosidasa, acoplando la desialilación a procesos catabólicos lisosomales más amplios y a la remodelación de glicanos. Mediante la regulación de los estados de sialilación en la superficie celular, NEU1 influye en el tráfico de receptores, la endocitosis y eventos de señalización relacionados con la inmunidad que dependen de la maduración de glicoproteínas. La alteración de la actividad de NEU1 se asocia con patología de almacenamiento lisosomal y con fenotipos inflamatorios y metabólicos modificados, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la homeostasis dependiente del lisosoma.

Neu1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NEU1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NEU1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NEU1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NEU1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.