Plasmide CRISPR d'Activation (h) netrin-1: sc-401871-ACT

Le gène humain **NTN1** code la nétrine‑1, un signal de guidage sécrété apparenté aux laminines, qui oriente le cheminement des axones et la migration neuronale tout en influençant également le comportement des cellules épithéliales et endothéliales. La nétrine‑1 interagit avec des récepteurs tels que **DCC** et des membres de la famille **UNC5** afin de coordonner la dynamique du cytosquelette, l’adhésion et les voies de signalisation de survie, avec des effets en aval sur des processus incluant la croissance des neurites, la fonction de barrière et le remodelage angiogénique. Au‑delà du développement, l’activité de **NTN1** est étudiée dans des contextes d’inflammation et de remodelage tissulaire, où des variations d’expression de la nétrine‑1 peuvent remodeler le trafic leucocytaire et les réponses vasculaires. Une signalisation **NTN1** dérégulée a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des altérations de la biologie du microenvironnement tumoral, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer des voies de signalisation dans des systèmes cellulaires variés.

netrin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NTN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

netrin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NTN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NTN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de netrin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NTN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de netrin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie netrin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NTN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.