netrin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401871-ACT

O gene humano **NTN1** codifica a netrina-1, um sinal de orientação secretado, relacionado à laminina, que direciona o percurso dos axônios e a migração neuronal, ao mesmo tempo em que influencia o comportamento de células epiteliais e endoteliais. A netrina-1 interage com receptores como o DCC e membros da família UNC5 para coordenar a dinâmica do citoesqueleto, a adesão e a sinalização de sobrevivência, com efeitos a jusante em processos que incluem o crescimento de neuritos, a função de barreira e o remodelamento angiogênico. Para além do desenvolvimento, a atividade de **NTN1** é estudada em contextos de inflamação e remodelamento tecidual, nos quais alterações na expressão de netrina-1 podem remodelar o tráfego de leucócitos e as respostas vasculares. A sinalização desregulada de **NTN1** tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e a alterações na biologia do microambiente tumoral, tornando-o um ponto útil para a dissecação de vias em diversos sistemas celulares.

netrin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NTN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

netrin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NTN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NTN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de netrin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NTN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de netrin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via netrin-1 em células tumorais com expressão de NTN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.