NERF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405891

Descripción general

ELF2 codifica NERF, un factor de transcripción de la familia ETS que se une a motivos de ADN ricos en purinas para regular programas de expresión génica que controlan la diferenciación hematopoyética, la activación de células inmunitarias y redes transcripcionales específicas de linaje. NERF participa en la transcripción dependiente de la ARN polimerasa II y coopera con otros factores de transcripción y reguladores de la cromatina para modular la actividad de promotores y potenciadores. La desregulación de la señalización de ELF2/NERF se ha vinculado con alteraciones en vías de proliferación y supervivencia en contextos hematológicos, lo que respalda su estudio en la leucemogénesis y la disrregulación inmunitaria. Como factor regulador nuclear, NERF también se utiliza como un nodo para desentrañar los circuitos transcripcionales impulsados por ETS y la remodelación de vías aguas abajo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NERF (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ELF2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ELF2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ELF2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NERF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ELF2 para la investigación de la señalización de NERF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ELF2 críticos para la función de NERF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ELF2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NERF CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NERF CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ELF2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NERF (h) y el plásmido HDR NERF (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ELF2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ELF2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.