Partículas Lentivirales de Activación (h) nephrin: sc-400368-LAC

El gen humano **NPHS1** codifica la **nefrina**, una proteína transmembrana de la superfamilia de las inmunoglobulinas que constituye un componente estructural central del **diafragma de hendidura** entre los pedicelos de los podocitos. La nefrina organiza la barrera de filtración formando interacciones extracelulares tipo “cremallera” y coordinando la señalización intracelular mediante proteínas adaptadoras como **NCK**, conectando la integridad del diafragma de hendidura con la remodelación del citoesqueleto de actina. Las vías dependientes de NPHS1 contribuyen a la polaridad de los podocitos, a la dinámica de las uniones célula–célula y a respuestas mecanosensibles que mantienen la permselectividad glomerular. La alteración o desregulación de la nefrina se asocia estrechamente con fenotipos de lesión de podocitos y con mecanismos de enfermedad renal proteinúrica, lo que convierte a **NPHS1** en una diana clave para estudiar la biología de la barrera glomerular.

Las partículas de activación lentiviral nephrin (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de NPHS1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral nephrin (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción NPHS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de nephrin. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo NPHS1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.