NEPH3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406190

Descripción general

KIRREL2 codifica NEPH3, una molécula de adhesión de la superfamilia de las inmunoglobulinas enriquecida en uniones especializadas célula–célula, donde favorece la formación y el mantenimiento de estructuras similares al diafragma de hendidura y la organización de la barrera epitelial. NEPH3 participa en señalización dependiente de contacto y en la remodelación del citoesqueleto mediante interacciones con proteínas andamiaje que coordinan la dinámica de la actina y la estabilidad de los complejos de unión. En contextos relevantes para el riñón, los complejos asociados a NEPH3 se relacionan con la arquitectura de los podocitos, la integridad de la barrera de filtración y las respuestas celulares al estrés mecánico o inflamatorio. La desregulación de las redes de adhesión de la familia NEPH se ha asociado con patología glomerular y con una diferenciación epitelial alterada, lo que hace de KIRREL2 una diana útil para estudiar la señalización en uniones y la homeostasis tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NEPH3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KIRREL2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KIRREL2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KIRREL2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NEPH3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KIRREL2 para la investigación de la señalización de NEPH3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KIRREL2 críticos para la función de NEPH3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KIRREL2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NEPH3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NEPH3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KIRREL2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NEPH3 (h) y el plásmido HDR NEPH3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KIRREL2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KIRREL2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.