Plásmido Doble Nickase (h) neogenin: sc-401204-NIC

El NEO1 humano codifica la neogenina, un receptor de guía transmembrana de la superfamilia de las inmunoglobulinas que se une a netrinas y a moléculas de guía repulsiva para coordinar la navegación axonal, la migración neuronal y la morfogénesis tisular. La señalización de la neogenina se integra con la remodelación del citoesqueleto y las vías de adhesión, y puede modular programas del desarrollo mediante el “cross-talk” entre receptores y la regulación dependiente del contexto de la supervivencia y la diferenciación celular. Más allá del sistema nervioso, NEO1 participa en la organización epitelial y en el desarrollo vascular y esquelético, conectando gradientes de señales de guía con el movimiento polarizado y las interacciones célula–célula. La expresión alterada de NEO1 o el desequilibrio de su vía se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con la biología tumoral, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la señalización de guía y del control del estado celular.

neogenin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NEO1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NEO1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NEO1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NEO1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.