neogenin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401204-ACT

ヒトNEO1は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する膜貫通型受容体ネオジェニン（neogenin）をコードしており、組織のパターニングや神経発生に重要な細胞—細胞間および細胞—細胞外基質（ECM）間相互作用を媒介します。ネオジェニンはネトリン（netrin）や反発性ガイダンス分子（RGM）などのガイダンス因子に結合し、細胞外シグナルを細胞骨格の再編成、接着、方向性移動の経路へと結び付けます。これらの相互作用を通じて、NEO1は軸索誘導、神経突起伸長、上皮組織の構築に寄与し、発生異常や、がんに関連した浸潤・分化プログラムの変化という観点からも研究されています。シグナル伝達と形態形成における文脈依存的な役割により、NEO1は受容体を介したガイダンスおよびリモデリング回路を研究するうえで有用なノードとなります。

neogenin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NEO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

neogenin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NEO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNEO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性neogeninの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNEO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるneogenin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNEO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるneogenin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。