NELF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-437310

Descripción general

Nsmf codifica NELF (factor embrionario nasal de LHRH), una proteína asociada a señales de guía implicada en la migración neuronal y la orientación de axones durante el desarrollo. En el ratón, NELF se relaciona con procesos que coordinan el crecimiento de neuritas, el desarrollo del sistema olfatorio/vomeronasal y el establecimiento de circuitos neuroendocrinos hipotalámicos. La alteración de la función de NSMF/NELF se ha asociado con hipogonadismo hipogonadotrópico congénito y fenotipos relacionados con el síndrome de Kallmann, lo que refleja su papel en el desarrollo de las neuronas GnRH y en la regulación del eje reproductor. Estas características hacen de Nsmf una diana útil para estudiar la neurobiología del desarrollo, la señalización neuroendocrina y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos de diferenciación neuronal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NELF (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nsmf en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nsmf junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nsmf tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NELF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nsmf para la investigación de la señalización de NELF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Nsmf críticos para la función de NELF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nsmf para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NELF CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido NELF CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nsmf. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NELF (m) y el plásmido HDR NELF (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nsmf para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nsmf definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.