Plásmido Doble Nickase (m) Nek7: sc-425603-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Nek7 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Nek7 (m) y el plásmido de doble nickasa Nek7 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Nek7. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Nek7 Anticuerpo (B-5): sc-393539
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Nek7 | sc-425603-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Nek7 de ratón codifica la quinasa 7 relacionada con NIMA (NEK7), una quinasa de serina/treonina que actúa aguas abajo de NEK9/NEK6 en el control mitótico y en procesos asociados al centrosoma. NEK7 contribuye a la organización de los microtúbulos, al ensamblaje del huso mitótico y a la progresión adecuada a través de la mitosis, lo que la vincula con la regulación de los puntos de control del ciclo celular y con la estabilidad genómica. Más allá de la proliferación, NEK7 se ha implicado en la señalización inflamatoria mediante la regulación de la activación del inflamasoma NLRP3, conectando la dinámica del citoesqueleto con las respuestas inmunitarias innatas. Por ello, la actividad o expresión desregulada de NEK7 es relevante para estudios de trastornos proliferativos, inestabilidad cromosómica y fisiopatología asociada a la inflamación en modelos murinos.
Nek7 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Nek7 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Nek7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Nek7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Nek7 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.