Plásmido Doble Nickase (h) Nek2: sc-417360-NIC

NEK2 codifica la quinasa serina/treonina Nek2, un regulador de la progresión del ciclo celular asociado al centrosoma que coordina la separación de los centrosomas, el ensamblaje del huso bipolar y la segregación fiel de los cromosomas. La actividad de Nek2 se integra con redes de control mitótico, incluida la fosforilación de sustratos centrosomales y la interacción con señales de puntos de control para mantener la estabilidad genómica. La expresión o actividad desregulada de NEK2 se ha vinculado con mitosis aberrante, aneuploidía y cambios en la capacidad proliferativa, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar los mecanismos de inestabilidad cromosómica. En modelos celulares humanos, la alteración de Nek2 permite investigar la dinámica del centrosoma, los defectos del huso y las respuestas transcripcionales posteriores relevantes para la biología del cáncer y otros trastornos proliferativos.

Nek2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NEK2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NEK2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NEK2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NEK2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.