Nek1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403501-ACT

NEK1は、細胞周期の制御、中心体および一次繊毛の生物学、ならびにDNA損傷応答の協調に関与するとされるセリン／スレオニンキナーゼであるNIMA関連キナーゼ1（Nek1）をコードします。Nek1は、リン酸化依存的に有糸分裂および修復関連の主要基質を制御することで、微小管ダイナミクス、チェックポイントシグナル、ゲノム安定性を調節するシグナル伝達過程に関与することが示されています。ヒト細胞では、NEK1活性の変化が繊毛形成（ciliogenesis）の異常や遺伝毒性ストレスに対する応答不全と関連しており、このキナーゼが細胞恒常性を形作る経路に結び付くことが示唆されます。さらに遺伝学的・機能的研究から、NEK1は神経変性やがんに関連するゲノム不安定性表現型など、疾患に関わる機序にも関与することが示されています。

Nek1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NEK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nek1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NEK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNEK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nek1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNEK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNek1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNEK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNek1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。