Partículas Lentivirales de Activación (h) NEDL2: sc-410607-LAC

El gen humano HECW2 codifica NEDL2, una ligasa E3 de ubiquitina tipo HECT que regula la proteostasis al catalizar la transferencia de ubiquitina a sustratos específicos, influyendo así en su estabilidad, localización y salida de señalización. NEDL2 está implicada en el control del desarrollo neuronal y la función sináptica mediante la modulación dependiente de ubiquitina de vías que gobiernan el recambio proteico, la dinámica del citoesqueleto y programas transcripcionales. La alteración de HECW2/NEDL2 se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo, lo que la convierte en un nodo relevante para estudiar cómo la ubiquitinación moldea las redes de señalización celular. En investigación biomédica, HECW2 ofrece un punto de entrada mecanístico para investigar la regulación mediada por ubiquitina en contextos neuronales y de otros tipos celulares, incluidos los efectos posteriores sobre la expresión génica y los circuitos de respuesta al estrés.

Las partículas de activación lentiviral NEDL2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HECW2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral NEDL2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HECW2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de NEDL2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HECW2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.