NEDL2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410607

Visão geral

HECW2 codifica a NEDL2, uma ligase E3 de ubiquitina do tipo HECT que regula o turnover proteico e a sinalização por meio da modificação, dependente de ubiquitina, de substratos celulares-chave. A atividade da NEDL2 contribui para a proteostase e influencia vias ligadas ao desenvolvimento neuronal, à função sináptica e a programas transcricionais responsivos ao estresse, ao modular a estabilidade e a disponibilidade de proteínas regulatórias. A disrupção ou regulação alterada de HECW2 tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e é estudada no contexto de uma sinalização aberrante por ubiquitina, que pode afetar o controle do ciclo celular, a diferenciação e a integridade do genoma. Como componente da via de ubiquitina, a NEDL2 é relevante para estudos mecanísticos de reconhecimento de substratos, especificidade da rede E2/E3 e efeitos a jusante em nós de sinalização.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NEDL2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HECW2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HECW2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HECW2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NEDL2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HECW2 para a investigação da sinalização de NEDL2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HECW2 críticos para a função NEDL2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HECW2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NEDL2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NEDL2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HECW2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NEDL2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NEDL2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HECW2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HECW2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.