NEDL1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406027

Descripción general

HECW1 codifica la ligasa E3 de ubiquitina-proteína humana NEDL1, una enzima con dominio HECT que cataliza la transferencia de ubiquitina a proteínas sustrato para regular su estabilidad y la salida de sus señales. NEDL1 participa en vías de proteostasis dependientes de ubiquitina que influyen en el recambio proteico, las respuestas al estrés y las decisiones sobre el destino celular, y se ha vinculado con la modulación de la señalización apoptótica y la homeostasis neuronal. Mediante ubiquitinación selectiva, NEDL1 puede moldear programas transcripcionales aguas abajo y redes de control de calidad que con frecuencia se ven alteradas en la neurodegeneración y en fenotipos celulares asociados al cáncer. Como resultado, HECW1 es de interés para diseccionar el cableado de la vía de la ubiquitina y la regulación específica de sustratos en sistemas celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NEDL1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HECW1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HECW1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HECW1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NEDL1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HECW1 para la investigación de la señalización de NEDL1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HECW1 críticos para la función de NEDL1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HECW1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NEDL1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NEDL1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HECW1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NEDL1 (h) y el plásmido HDR NEDL1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HECW1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HECW1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.