Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) NEDD8: sc-417924-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)NEDD8 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NEDD8 (h) y el plásmido de doble nickasa NEDD8 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NEDD8. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NEDD8 Anticuerpo (H-2): sc-373741
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) NEDD8 | sc-417924-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) NEDD8 | sc-417924-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NEDD8 codifica un modificador tipo ubiquitina que se conjuga covalentemente a sustratos en la vía de neddilación, en particular a proteínas de la familia cullina que actúan como andamiaje de las ligasas E3 de ubiquitina cullina–RING (CRL). La conjugación de NEDD8 regula el recambio proteico, la progresión del ciclo celular, la replicación y reparación del ADN y la señalización de estrés al modular la actividad de las CRL y, aguas abajo, la proteostasis dependiente de ubiquitina. La alteración de la neddilación modifica el control de los puntos de control, la estabilidad del genoma y los programas transcripcionales, lo que vincula la desregulación de la vía de NEDD8 con fenotipos proliferativos y con el reconfigurado de la señalización observado en múltiples contextos patológicos. Como nodo central de las modificaciones postraduccionales de tipo ubiquitina, NEDD8 se estudia ampliamente en proteómica, mapeo de vías y cribados de genómica funcional.
NEDD8 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NEDD8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NEDD8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NEDD8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NEDD8 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.