NEDD4 Lentiviral Activation Particles (m): sc-421848-LAC

マウスのNedd4は、HECTドメインを有するE3ユビキチンリガーゼであるNEDD4をコードしており、膜受容体、イオンチャネル、シグナル伝達中間体へのユビキチン転移を触媒することで、タンパク質の分解・代謝回転およびシグナル伝達を制御します。NEDD4はWWドメインによるPYモチーフ基質の認識を介して、細胞表面タンパク質のエンドサイトーシスやトラフィッキングに影響を与え、PI3K–AKT、TGF-β、EGFR関連シグナルなどの経路を調節し、その下流で細胞増殖、生存、遊走に作用します。さらにNEDD4の活性は、プロテオスタシスやストレス応答ネットワークとも交差し、ユビキチン依存的に細胞内シグナル複合体の再編成を形作ります。NEDD4依存的ユビキチン化の破綻は、上皮輸送の変化、異常な増殖シグナル、免疫・神経機能障害など、疾患に関連する表現型に関与することが示唆されており、機構研究の有用なハブ分子となっています。

NEDD4 レンチウイルス活性化粒子（m）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なNedd4の発現上昇を可能にします。

NEDD4 レンチウイルス活性化粒子（m）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、Nedd4転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性NEDD4の発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のNedd4ゲノム座および制御機構を維持します。

レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。