Plásmido Doble Nickase (h) NEDD4-L: sc-403647-NIC

NEDD4L codifica NEDD4-L, una ligasa E3 de ubiquitina con dominio HECT que regula el recambio proteico y la abundancia de proteínas de membrana al catalizar la conjugación de ubiquitina a sustratos específicos. Es un modulador clave del tráfico del canal epitelial de sodio (ENaC) y de la homeostasis iónica, y también se integra con señales de crecimiento y de estrés mediante el control dependiente de ubiquitina de componentes de distintas vías. Se ha implicado a NEDD4-L en la regulación de la señalización TGF-β/SMAD, de los efectos de salida de la vía Wnt y de respuestas celulares que moldean programas de proliferación y diferenciación. La desregulación de la expresión o la actividad de NEDD4L se asocia con alteraciones en la fisiología del transporte epitelial y se ha descrito en estudios de biología del cáncer y de rasgos cardiometabólicos, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en la investigación de la señalización por ubiquitina.

NEDD4-L El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NEDD4L en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NEDD4L. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NEDD4L. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NEDD4L alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.