Plasmide CRISPR/Cas9 KO NEDD4-L (m): sc-429949

Présentation

Nedd4l code NEDD4-L, une ligase E3 à ubiquitine de type HECT qui régule le renouvellement des protéines en catalysant l’ubiquitination de protéines membranaires et de signalisation, notamment des canaux ioniques et des transporteurs tels qu’ENaC. En modulant l’endocytose dépendante de l’ubiquitine ainsi que la dégradation lysosomale/protéasomale, NEDD4-L influence l’homéostasie ionique épithéliale et des voies de transduction du signal impliquées dans les réponses au stress cellulaire et le remodelage tissulaire. Dans les modèles murins, une activité altérée de Nedd4l a été associée à une dysrégulation de la gestion du sodium et du contrôle de la pression artérielle, et a été étudiée dans des contextes de physiologie rénale, de phénotypes cardiovasculaires et de signalisation inflammatoire. NEDD4-L interagit également avec des voies contrôlant la polarité et la différenciation cellulaires, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la fonction de barrière épithéliale et des processus de développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NEDD4-L (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nedd4l dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nedd4l, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nedd4l à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NEDD4-L.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nedd4l pour l'étude de la signalisation de NEDD4-L, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nedd4l essentiels à la fonction de NEDD4-L
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nedd4l pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NEDD4-L plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NEDD4-L plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nedd4l. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NEDD4-L plasmide HDR (m) et le NEDD4-L (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nedd4l pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nedd4l définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.