NEDD4-L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429949

Panoramica

Nedd4l codifica NEDD4-L, una ligasi E3 dell’ubiquitina con dominio HECT che regola il turnover proteico catalizzando l’ubiquitinazione di proteine di membrana e di segnalazione, inclusi canali ionici e trasportatori come ENaC. Modulando l’endocitosi dipendente dall’ubiquitina e la degradazione lisosomiale/proteasomiale, NEDD4-L influenza l’omeostasi ionica epiteliale e le vie di trasduzione del segnale implicate nelle risposte allo stress cellulare e nel rimodellamento tissutale. Nei sistemi murini, un’attività alterata di Nedd4l è stata associata a una gestione disfunzionale del sodio e al controllo della pressione arteriosa, ed è stata studiata in contesti di fisiologia renale, fenotipi cardiovascolari e segnalazione infiammatoria. NEDD4-L interagisce inoltre con vie che controllano la polarità e la differenziazione cellulare, risultando quindi rilevante per studi sulla funzione di barriera epiteliale e sui processi di sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NEDD4-L (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nedd4l in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nedd4l insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nedd4l a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NEDD4-L.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nedd4l per lo studio della segnalazione di NEDD4-L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nedd4l critici per la funzione di NEDD4-L
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nedd4l per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NEDD4-L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NEDD4-L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nedd4l. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NEDD4-L Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NEDD4-L (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nedd4l per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nedd4l definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.