Plásmido Doble Nickase (h) NEDD4: sc-401748-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)NEDD4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NEDD4 (h) y el plásmido de doble nickasa NEDD4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NEDD4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NEDD4 Anticuerpo (F-11): sc-518160
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) NEDD4 | sc-401748-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) NEDD4 | sc-401748-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **NEDD4** codifica una ligasa E3 de ubiquitina-proteína que cataliza la transferencia de ubiquitina a sustratos para regular el recambio proteico, el tráfico intracelular y la amplitud de la señalización. A través de sus dominios C2 y WW, NEDD4 reconoce dianas que contienen motivos PY e influye en vías como la señalización PI3K–AKT, la endocitosis y la homeostasis de receptores de membrana. La ubiquitinación dependiente de NEDD4 modula la polaridad epitelial y los programas de migración celular, y se ha relacionado con la regulación de supresores tumorales y receptores de factores de crecimiento en múltiples contextos celulares. La actividad desregulada de NEDD4 y la selección de sustratos se han asociado con una reconfiguración de la señalización relacionada con el cáncer y con alteraciones de procesos inmunitarios y neuronales, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación impulsada por la ubiquitina.
NEDD4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NEDD4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NEDD4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NEDD4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NEDD4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.