Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nectin 2: sc-401994-ACT

NECTIN2 code la nectine‑2 (CD112), une molécule d’adhérence cellulaire de type immunoglobuline, concentrée aux jonctions d’adhérence, où elle assure des contacts cellule–cellule indépendants du Ca2+ grâce à des interactions homophiles et hétérophiles. En recrutant l’afadine (AF6) et en se coordonnant avec les complexes cadhérine–caténine, la nectine‑2 influence l’assemblage des jonctions, la polarité épithéliale et le remodelage du cytosquelette lors de l’organisation tissulaire et de la migration. La nectine‑2 participe aussi à la reconnaissance immunitaire en tant que ligand de DNAM‑1 (CD226) et de TIGIT, reliant ainsi la biologie de l’adhérence à la signalisation des cellules NK et T au niveau des synapses immunologiques. Une expression dysrégulée de NECTIN2 a été associée à des états d’adhérence altérés, à des phénotypes d’échappement immunitaire et à des caractéristiques liées à la progression dans de nombreuses tumeurs, ce qui soutient son exploration en biologie des barrières et des interactions tumeur–système immunitaire.

Nectin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NECTIN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nectin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NECTIN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NECTIN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nectin 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NECTIN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nectin 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nectin 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NECTIN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.