NDUFS3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427031

Descripción general

Ndufs3 codifica NDUFS3, una subunidad esencial del complejo I de la cadena respiratoria mitocondrial (NADH:ubiquinona oxidorreductasa) codificada en el núcleo, que facilita la transferencia de electrones desde el NADH a la ubiquinona y contribuye al bombeo de protones a través de la membrana interna mitocondrial. La función adecuada de NDUFS3 es necesaria para una fosforilación oxidativa eficiente, el mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial y la regulación del equilibrio redox celular. La alteración de componentes del complejo I puede perjudicar la producción de ATP y aumentar las especies reactivas de oxígeno, influyendo en la remodelación metabólica y en la señalización asociada al estrés. En modelos murinos, la perturbación de Ndufs3 es relevante para estudiar mecanismos de disfunción mitocondrial implicados en fenotipos neuromusculares, cardíacos y asociados a la neurodegeneración.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NDUFS3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ndufs3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ndufs3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ndufs3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NDUFS3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ndufs3 para la investigación de la señalización de NDUFS3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ndufs3 críticos para la función de NDUFS3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ndufs3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NDUFS3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido NDUFS3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ndufs3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NDUFS3 (m) y el plásmido HDR NDUFS3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ndufs3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ndufs3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.