NDUFB5 Double Nickase Plasmid (h): sc-410902-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NDUFB5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NDUFB5 Double-Nickase-Plasmid (h) und NDUFB5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NDUFB5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NDUFB5: sc-514245
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NDUFB5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-410902-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NDUFB5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410902-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NDUFB5 kodiert eine akzessorische Untereinheit des mitochondrialen Atmungskettenkomplexes I (NADH:Ubiquinon-Oxidoreduktase), die zu einer korrekten Assemblierung des Komplexes und zum Elektronentransfer von NADH auf Ubiquinon beiträgt. Über seine Rolle in der oxidativen Phosphorylierung beeinflusst NDUFB5 die Aufrechterhaltung des mitochondrialen Membranpotenzials, die ATP-Produktion und das zelluläre Redoxgleichgewicht, mit nachgeschalteten Effekten auf die Homöostase reaktiver Sauerstoffspezies. Eine veränderte Funktion von Komplex I ist mit mitochondrialem bioenergetischem Stress, metabolischer Umprogrammierung und erhöhter Verwundbarkeit von Geweben mit hohem Energiebedarf verbunden, wodurch NDUFB5 ein relevanter Ansatzpunkt für die Untersuchung mitochondrialer Dysfunktionen ist. Forschung zu NDUFB5 überschneidet sich häufig mit Signalwegen, die die mitochondriale Proteostase, Mitophagie und nukleär-mitochondriale Signalantworten auf eine beeinträchtigte Atmungskettenfunktion steuern.
NDUFB5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NDUFB5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NDUFB5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NDUFB5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NDUFB5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.