Plásmido CRISPR de Activación (h) NDUFB5: sc-410902-ACT

El gen humano **NDUFB5** codifica una pequeña subunidad accesoria del **complejo I** de la cadena respiratoria mitocondrial (NADH:ubiquinona oxidorreductasa) que favorece el ensamblaje adecuado y la transferencia de electrones dentro de la fosforilación oxidativa. Al contribuir al bombeo de protones y al mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial, NDUFB5 influye en la producción de ATP y en la homeostasis redox, procesos estrechamente vinculados a la señalización por ROS y a la adaptación metabólica. La alteración de la función del complejo I es ampliamente relevante en la biología de las enfermedades mitocondriales y se ha observado en contextos de disfunción neuromuscular, neurodegeneración y metabolismo tumoral, donde el estrés bioenergético y la remodelación mitocondrial son prominentes. Por ello, NDUFB5 es una diana útil para estudiar la integridad de la cadena respiratoria, la comunicación mito-nuclear y las vías que acoplan el metabolismo energético a decisiones sobre el destino celular.

NDUFB5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NDUFB5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NDUFB5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NDUFB5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NDUFB5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NDUFB5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NDUFB5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NDUFB5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NDUFB5 en células tumorales con expresión de NDUFB5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.