NDST1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404078-ACT

NDST1 kodiert die N-Deacetylase/N-Sulfotransferase 1, ein im Golgi-Apparat lokalisiertes Enzym, das zentrale Modifikationsschritte während der Biosynthese von Heparansulfat katalysiert, darunter die N-Deacetylierung und N-Sulfatierung von Glucosaminresten. Diese Reaktionen prägen die Sulfatierungsmuster von Heparansulfat, die Bindung und Signalausgabe von Wachstumsfaktoren, Morphogenen und Chemokinen an Proteoglykanen der extrazellulären Matrix und der Zelloberfläche bestimmen. Durch die Modulation heparansulfatabhängiger Signalwege wie FGF-, Wnt-, Hedgehog- und BMP-Signalisierung beeinflusst NDST1 Zelladhäsion, Migration, Differenzierung und Gewebemusterbildung. Eine dysregulierte Umgestaltung von Heparansulfat wurde mit veränderten Entwicklungsprogrammen und mikroumgebungsabhängiger Signalübertragung in Verbindung gebracht, die für Krebsbiologie, Entzündung sowie neurologische und vaskuläre Phänotypen relevant sind; dies motiviert mechanistische Studien zur von NDST1 gesteuerten Architektur von Glykosaminoglykanen.

NDST1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NDST1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NDST1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NDST1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NDST1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NDST1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NDST1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NDST1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NDST1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NDST1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.