Partículas Lentivirales de Activación (h) NDRG1: sc-402294-LAC

NDRG1 (gen 1 regulado aguas abajo por N-myc) codifica una proteína citoplasmática que participa en las respuestas al estrés celular, la diferenciación y la regulación de la proliferación. NDRG1 se ha vinculado al control del tráfico de membrana y la organización del citoesqueleto, con efectos posteriores sobre la plasticidad epitelio-mesenquimal, la migración y programas de señalización relacionados con la adhesión. Su expresión responde a la hipoxia y a contextos de señalización oncogénica, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la adaptación transcripcional al estrés del microambiente. Se ha informado desregulación de NDRG1 en múltiples modelos de enfermedad, incluida la biología del cáncer y la neuropatía periférica, lo que respalda estudios mecanísticos de la regulación del estado celular.

Las partículas de activación lentiviral NDRG1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de NDRG1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral NDRG1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción NDRG1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de NDRG1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo NDRG1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.