Plásmido CRISPR de Activación (h) NDR2: sc-404096-ACT

STK38L codifica NDR2, una quinasa de serina/treonina de la rama NDR/LATS de la red de señalización Hippo, que coordina la progresión del ciclo celular, la apoptosis y la remodelación del citoesqueleto. La actividad de NDR2 se regula mediante fosforilación e interacciones con proteínas andamiaje, integrando quinasas MST aguas arriba y señales dependientes de calcio para ajustar las salidas transcripcionales y postranscripcionales. A través de estas vías, STK38L contribuye al control de la proliferación, la polaridad, la migración y las respuestas al estrés, procesos que con frecuencia se alteran en el cáncer y otros trastornos de la homeostasis tisular. La alteración de la señalización de NDR2 también se ha relacionado con cambios en la diferenciación y supervivencia neuronal, lo que respalda su relevancia en estudios del desarrollo y de fenotipos celulares asociados a la neurodegeneración.

NDR2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STK38L sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NDR2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STK38L en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STK38L, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NDR2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STK38L y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NDR2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NDR2 en células tumorales con expresión de STK38L silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.